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Discover, Mars 6, Discover SP-D
Hydrolyse des protéines accélérée par micro-ondes - réduit le temps d'hydrolyse à quelques minutes seulement
L'hydrolyse des protéines est une procédure de digestion éprouvée datant des années 50 (Stein et Moore) des protéines et des peptides pour l'analyse des acides aminés. L'analyse des acides aminés (AAA) permet de quantifier les différents acides aminés de chaque échantillon et constitue une condition préalable à l'identification de la séquence d'acides aminés de la protéine/du peptide.
L'étape d'hydrolyse s'effectue typiquement à une température de 110 °C avec un acide chlorhydrique 6N et rompt toutes les liaisons entre les différents acides aminés de la protéine/du peptide à analyser. Cette étape prend beaucoup de temps et dure classiquement 20 à 24 heures. Des conditions de réaction inertes sont également créées afin que l'oxygène de l'air ne puisse pas réagir avec les acides aminés. Cette étape d'hydrolyse peut être réalisée en phase gazeuse pour obtenir des limites de détection basses, en particulier pour les petites quantités d'échantillons (500 picomoles/ 100 µg). De plus grandes quantités d'échantillons sont souvent traitées en contact direct avec l'acide chlorhydrique (hydrolyse en phase liquide).
L'hydrolyse des protéines assistée par micro-ondes permet de réaliser rapidement et en douceur des hydrolyses liquides dans le Mars 6 ou le Discover SP-D ainsi que des hydrolyses en phase gazeuse dans le Discover.
Technologies d'hydrolyse
Hydrolyse en phase gazeuse
La technologie des micro-ondes permet d'obtenir certains avantages dans cette méthode de travail bien établie :
- Le gain de temps grâce à l'utilisation de la technique des micro-ondes est également énorme pour l'hydrolyse des protéines. Au lieu d'effectuer les réactions de décomposition pendant la nuit, les micro-ondes permettent d'obtenir des résultats comparables en seulement 15 minutes.
- L'efficacité de la décomposition est augmentée. La digestion sous activation par micro-ondes a été nettement améliorée, en particulier pour les protéines hydrophobes.
- Il est possible d'utiliser jusqu'à 10 flacons standard HPLC Autosampler (100 - 300 µl) en un seul cycle. Toutes les 15 minutes, 10 échantillons peuvent à nouveau être hydrolysés, ce qui permet de réaliser un débit d'échantillons extrêmement élevé.
Hydrolyse liquide
L'hydrolyse des protéines sert à scinder toutes les liaisons peptidiques d'une chaîne protéique. Les acides aminés libres ainsi obtenus sont quantifiés par analyse des acides aminés. Les protéines sont isolées à partir d'organismes vivants (biochimie, biotechnologie...), d'aliments et d'aliments pour animaux (laiteries, charcuteries, brasseries et industrie des boissons) ou de sang et d'urine à des fins de diagnostic. L'hydrolyse des protéines assistée par micro-ondes dans le MARS 6 et Discover permet une décomposition rapide et reproductible des chaînes peptidiques ou protéiques. Le temps d'hydrolyse peut être réduit de plusieurs heures à quelques minutes. De plus, l'équipement nécessaire à l'hydrolyse par micro-ondes est moins important que celui nécessaire à la technique classique.
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