Nick translation

Unter Nick translation versteht man eine DNA-Markierungstechnik. Dabei nutzt man die Reparaturfunktion der DNA-Polymerase I aus, um markierte Nukleotide in Strangbrüche, sogenannte nicks einzubauen.

Weiteres empfehlenswertes Fachwissen

Wie kann man Pipetten schnell überprüfen?

Empfindlichkeitsprüfung von Laborwaagen

Was ist der richtige Weg, um die Wiederholbarkeit bei Waagen zu überprüfen?

Die DNA-Polymerase I ist ein Enzym, das Strangbrüche oder Einzelstranglücken in der DNA, die zu Störungen bei der Transkription oder durch mechanische Beanspruchung sogar zum Riss des DNA-Fadens führen können, reparieren kann. Dazu besitzt sie eine 5'->3'-Exonuklease-Aktivität, bei der die Nukleotide vom 5'-Ende aus in Richtung 3'-Ende entfernt, ersetzt, und am 5'-Ende korrekt verkettet werden. Der Strangbruch wird dabei nicht geschlossen (das würde eine DNA-Ligase machen), sondern verschoben.

Gibt man als Substrat radioaktiv (³H, α-³²P) oder durch ein Makromolekül (Digoxygenin, Biotin, Fluoreszenzmarker) markierte Nukleotide hinzu, werden diese eingebaut und markieren einen langen Bereich des DNA-Stranges. Die Markierungsintensität hängt von der Anzahl der Strangbrüche ab und dies wird durch die Konzentration an hinzugegebener DNase I bestimmt, die die nicks verursacht.
Der Nachweis der Markierung hängt vom Marker ab. Das Sichtbarmachen erfolgt durch ein Fluoreszenzmikroskop oder Blotting-Techniken.

Dieses Markierungssystem wurde 1977 von Peter W.J. Rigby und Kollegen entwickelt.

Literatur

• Rigby, PWJ et al.: "Labeling deoxyribonucleic acid to high specific activity in vitro by nick translation with DNA polymerase I"; J. Mol. Biol., 113, 237-251. (1977)

Siehe auch

• Random priming