21-Hydroxylase ist ein Enzym, das bei der Biosynthese der Steroidhormone Aldosteron und Cortisol beteiligt ist. Es katalysiert eine Oxidation des Kohlenstoffatoms 21 in Steroiden, welche bei der Bildung dieser Hormone nötig ist.

21-Hydroxylase wird über das Gen CYP21B gebildet. Ein Defekt innerhalb dieses Gens bewirkt eine Störung der Bildungs des Enzyms, welche zum Adrenogenitalen Syndrom Typ 3 führt.