PyroDetect System: Die humane Alternative unter den Pyrogentests

Das PyroDetect System ist ein revolutionärer Test für den Nachweis und die Quantifizierung von Pyrogenen auf Basis des Monozyten-Aktivierungstests (MAT).

Das PyroDetect System nutzt eine angeborene Immunreaktion. Durch Pyrogene aktivierte Monozyten produzieren Cytokine, die in einem immunologischen Test (ELISA) mittels spezifischer Antikörper und einer enzymatischen Farbreaktion nachgewiesen werden.

Das PyroDetect System besteht aus drei wesentlichen Schritten: der Inkubation von Cryoblut (oder Frischblut), dem IL-1ß ELISA und der Auswertung.

Cryoblut-Inkubation
Das PyroDetect System verwendet Cryoblut (gepooltes und gefrorenes humanes Vollblut) für die Blutinkubation. Innerhalb der ersten vier Stunden nach der Blutentnahme kann auch Frischblut verwendet werden. Die Probenlösung wird mit dem Blut in der Zellkulturplatte gemischt und Übernacht bei 37 °C und 5 % CO₂ in einem Brutschrank inkubiert, um Temperatur- und pH-Stabilität zu gewährleisten. Wenn Pyrogene in der Probe vorhanden sind, produzieren die Monozyten während der Inkubation IL-1ß.

IL-1ß ELISA
Zum Nachweis von IL-1ß wird die Cryoblut-Mischung nach der Inkubation in eine ELISA-Mikrotiterplatte übertragen, die mit einem IL-1ß-spezifischen Antikörper beschichtet ist. Im Kulturüberstand vorhandene Interleukin-Moleküle werden von dem immobilisierten Antikörper gebunden. Danach wird ein Enzym-markierter, IL-1ß-spezifischer mono-klonaler Antikörper zugegeben. Durch die Zugabe des Substrats wird eine Farbreaktion gestartet, die den Nachweis des gebundenen IL-1ß-Komplexes in einem ELISA-Lesegerät ermöglicht.

Auswertung
Die Pyrogen-Konzentration in der Probe wird anschließend über die IL-1ß-Konzentration aus der Endotoxin -Standardkurve bestimmt. Das PyroDetect System bietet einen hohen Sicherheitsstandard durch die Verwendung einer positiven und einer negativen Kontrolle. Die robuste Anwendung des Tests wurde 2005 in einer internationalen Validierungsstudie belegt, die durch das European Centre for the Validation of Alternative Methods to Animal Experimentation (ECVAM) koordiniert wurde. Zahlreiche veröffentlichte Studien zeigen die Zuverlässigkeit und Reproduzierbarkeit des MAT. Die Reproduzierbarkeit des PyroDetect Systems wurde in Testserien mehrerer Anwender gezeigt.

Das PyroDetect System deckt ein breites Pyrogenspektrum im mikrobiellen Bereich ab. Tests mit Lipoteichonsäure (LTA) zeigen den Nachweis der Zellwandbestandteile von gram-positiven Bakterien mit dem PyroDetect System. Wie erwartet, zeigt der LAL Test ausschließlich bei hoch konzentrierter LTA eine Reaktion. Diese beruht auf Spuren von Endotoxin in den LTA-Präparaten. Somit reduziert das PyroDetect System das Sicherheitsrisiko von nicht-endotoxinen Pyrogenen und stellt eine effektive Ergänzung zum LAL Test dar.

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