LightCycler^®Systeme zur EHEC-Identifizierung

Angesichts des EHEC-Ausbruchs (Enterohämorrhagische Escherichia coli) in Europa bieten Roche Applied Science und TIB Molbiol für den Wissenschaftsbereich Technologien an, mit denen EHEC-Erreger schnell identifiziert und nachgewiesen werden können.

Seit der zweiten Maiwoche 2011 stieg die Zahl der Fälle von blutigem Durchfall verbunden mit dem hämolytisch-urämischen Syndrom (HUS). Bisher wurden dem Robert Koch Institut insgesamt 3.304 EHEC- oder HUS-Fälle übermittelt, darunter 38 verstorbene EHEC- oder HUS-Patienten (Bericht des RKIs vom 16.06.2011).

Der schnelle, zuverlässige Nachweis des Bakteriums EHEC ist entscheidend für die Überwachung und Kontrolle von der Infektionen. Für die schnelle und sensitive Identifizierung des EHEC-Bakteriums am besten als Target geeignet sind bestimmte genetische Sequenzen, die mit Hilfe der Polymerasekettenreaktion (PCR) amplifiziert und nachgewiesen werden. Roche Applied Science bietet Komplettsysteme für die PCR an, darunter LightCycler^® Instrumente, Software, Reagenzien und Verbrauchsmaterialien. Diese Nachweissysteme sind für die wissenschaftliche Forschung konzipiert. Sie ermöglichen eine schnelle Entwicklung und Anpassung von PCR-Assays und geeigneter Diagnostikwerkzeuge.

Der EHEC-Nachweis durch Real-Time PCR mit dem LightCycler^® System wurde bereits 2002 entwickelt und in einer gemeinsamen Publikation (J. Clin. Microbiol. (2002) 40, 2555-2565) von Wissenschaftlern der Universitäten Regensburg (Prof. Dr. U. Reischl) und Münster (Prof. Dr. H. Karch) sowie des Center for Disease Control in Atlanta, USA (Dr. N. Strockbine) dargestellt. Seit 2002 findet dieser Real-Time PCR-Test weltweit in vielen Laboren Anwendung.

Ein EHEC PCR-Test wird nun als LightMix^® Kit EHEC von TIB Molbiol angeboten. Darin enthalten sind vorgemischte Primer und Sonden und eine geeignete Positivkontrolle für den Nachweis mit den LightCycler^® Instrumenten. Mit dem Test, der in weniger als einer Stunde durchgeführt werden kann, können beide Shigatoxin-Gene nachgewiesen und differenziert werden. Der Test-Kit basiert auf dem bereits publizierten Assay von Grys et al. (J. Clin. Microbiol. (2009) 47, 2008-2012).

Die Standardprozedur für den Nachweis von EHEC macht es erforderlich, über Nacht eine Bakterienkultur aus Stuhlproben der Patienten anzulegen, bevor der PCR-Test durchgeführt werden kann. Um etwa bei einem EHEC-Ausbruch und Proben mit blutigem Durchfall schneller zum Ergebnis zu gelangen, lassen sich die bakteriellen Nukleinsäuren auch direkt aus Stuhlproben mit Hilfe einer MagNa Pure Extraktion (System zur automatisierten Probenaufbereitung) von Roche Applied Science isolieren. Dieser automatisierte Arbeitsgang, der direkt von der Real-Time PCR gefolgt wird, wird derzeit in einigen Laboren geprüft.