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Zellkultur



Als Zellkultur wird die Kultivierung tierischer oder pflanzlicher Zellen in einem Nährmedium außerhalb des Organismus bezeichnet. Zelllinien sind Zellen einer Gewebeart, die sich im Lauf dieser Zellkultur unbegrenzt fortpflanzen können. Es werden sowohl immortalisierte (unsterbliche) Zelllinien als auch primäre Zellen kultiviert (Primärkultur). Als Primärkultur bezeichnet man eine nicht immortalisierte Zellkultur, die direkt aus einem Gewebe gewonnen wurde. Zellkulturen finden breite Verwendung in der biologischen und medizinischen Forschung, Entwicklung und Produktion.

Inhaltsverzeichnis

Geschichte

Seit den Anfängen der naturwissenschaftlichen Forschung gab es Bestrebungen, Zellen und Gewebe auch außerhalb eines Organismus am Leben zu erhalten, um sie so nähergehend untersuchen zu können. Wilhelm Roux gelang es erstmals 1885, embryonale Hühnerzellen für mehrere Tage in einer Salzlösung am Leben zu erhalten und so das grundlegende Prinzip zu demonstrieren. Im Jahr 1913 zeigte Alexis Carrel, dass Zellen auch länger in Zellkultur wachsen können, insofern sie gefüttert und aseptisch gehalten werden.

In den Jahren 1951/1952 wurde erstmals eine unsterbliche menschliche Zelllinie aus einem Cervixkarzinom etabliert, welche später unter dem Namen HeLa bekannt wurde. In den folgenden Jahrzehnten wurden insbesondere Nährmedien, Wachstumsfaktoren und Bedingungen weiterentwickelt und neue Zelllinien etabliert. César Milstein und Georges Köhler entdeckten 1975 die Möglichkeit zur Bildung monoklonaler Antikörper durch Zellfusion von Lymphozyten mit Krebszellen. Weiterhin wurde in diesen Jahren Methoden zur gezielten Einführung und Expression von Genen in Zellen, die sogenannte Transfektion, entwickelt [1].

Körperzellen, die noch nicht ausdifferenziert sind - sogenannte Stammzellen, wurden erstmals 1981 aus Blastozysten einer embryonalen Maus isoliert. Sie neigen in vitro dazu, spontan zu differenzieren. Dies kann durch Faktoren unterbunden werden, welche die Selbsterneuerung der Zellen fördern. Mehrere solcher Stoffe wurden seit Ende der 1980er Jahre identifiziert. Die Forschung in diesem Feld konzentriert sich derzeit auf die Kultivierung und gezielte Ausdifferenzierung von sowohl embryonalen als auch adulten Stammzellen.

Ablauf

Das Anlegen von Primärkulturen kann aus unterschiedlichen Geweben erfolgen, beispielsweise aus ganzen Embryonen oder einzelnen Organen wie Haut, Niere usw. Das Gewebe wird mit einer Protease, beispielsweise Trypsin, behandelt, die die Proteine abbaut, die den Zellverband aufrechterhalten. Dadurch werden die Zellen vereinzelt. Durch Zugabe von Wachstumsfaktoren können gezielt manche Zelltypen zur Teilung angeregt werden.

Die einem tierischen oder humanen Gewebe entnommenen Tumorzellen werden nach anfänglichem Wachstum auf einem Nährboden durch Analyse von Oberflächenantigenen (Immunzytologie) oder des Genoms (PCR und Sequenzierung)analysiert und ausgewählt, um dann einen großen Tumorzellklon in Kultur zu bringen. Die Zellen können auch durch Einschleusung eines Plasmids als Vektor genetisch verändert werden. Von der Stammkultur (stock) werden Zellen abgenommen und in flüssigem Stickstoff tiefgekühlt und stehen so dem Versand an andere Forschungseinrichtungen zur Verfügung.

Die meisten Zelllinien besitzen eine eingeschränkte Lebensdauer, mit Ausnahme von einigen von Tumoren abstammenden Zellen. Nach einer bestimmten Anzahl von Verdopplungen gehen diese Zellen in die Seneszenz und teilen sich nicht mehr. Etablierte oder unsterbliche Zelllinien haben die Fähigkeit erlangt, sich unendlich zu teilen - entweder durch zufällige Mutation (in Tumorzellen), oder durch gezielte Veränderung (beispielsweise durch die künstliche Expression des Telomerase-Gens).

Man unterscheidet auch adhärent (auf Oberflächen) wachsende Zellen, beispielsweise Fibroblasten, Endothelzellen, Knorpelzellen, und Suspensionszellen, die frei im Nährmedium schwimmend wachsen, wie zum Beispiel Lymphozyten. Die Kulturbedingungen unterscheiden sich stark zwischen den einzelnen kultivierten Zelllinien. Die verschiedenen Zelltypen bevorzugen dabei unterschiedliche Nährmedien, die spezifisch zusammengestellt werden, beispielsweise der pH, der Anteil an Aminosäuren oder Nährstoffen. In der Regel wachsen Zelllinien bei 37°C mit einer Atmosphäre von 5% CO2 in speziellen Inkubatoren. Je nach Teilungsrate und Dichte der Zellen werden die Zellverbände alle paar Tage gelöst und auf neue Gefäße verteilt ("splitting" genannt).

Anwendung

Zellkulturen finden besonders in Forschung und Entwicklung breite Anwendung. Der Stoffwechsel, die Teilung und viele weitere zelluläre Prozesse können so in der Grundlagenforschung untersucht werden. Weiterhin werden kultivierte Zellen als Testsysteme eingesetzt, beispielsweise bei der Untersuchung der Wirkung von Substanzen auf die Signaltransduktion und Toxizität der Zelle. Hierbei wird auch die Anzahl von Tierversuchen drastisch reduziert.

Für die Herstellung von etlichen biotechnischen Produkten haben Zellkulturen ebenfalls hohe Bedeutung. Beispielsweise werden monoklonale Antikörper für Forschung und therapeutische Anwendung in der Medizin mittels Zellkultur hergestellt. Obwohl einfache Proteine mit weniger Aufwand auch in Bakterien produziert werden können, müssen komplexere Proteine in der Zellkultur hergestellt werden, da nur hier die passenden Glykosylierungen der Proteine erfolgt. Ein Beispiel hierfür ist Erythropoetin (EPO). Auch viele Impfstoffe werden in der Zellkultur hergestellt.

In der Pflanzenvermehrung erzeugt man bei der Meristemvermehrung aus Meristemzellkulturen komplette Pflanzen.

Zellkultur-Linien

Zelllinie Bedeutung Ursprungsspezies Ursprungsgewebe Morphologie Link
HEK-293 human embryonic kidney Mensch Niere (embryonal) Epithel ATCC
BHK-21 syrian baby hamster kidney Hamster Niere (embryonal) Fibroblast DSMZ
HeLa Henrietta Lacks Mensch Zervixkarzinom (Gebärmutterhalskrebs) Epithel DSMZ
CHO Chinese hamster ovary Hamster Ovarien Epithel ICLC
Sf-9 Spodoptera frugiperda Insekt - Spodoptera frugiperda (Nachtfalter) Ovar DSMZ
NIH-3T3 NIH, 3-day transfer, inoculum 3 x 105 cells Maus Embryo Fibroblast ATCC
MTD-1A Maus Epithel
bEnd.5 brain endothelial Maus Gehirn Endothel
bEnd.3 brain endothelial Maus Gehirn / cerebral Cortex Endothel ATCC
MCF-10A Michigan Cancer Foundation Mensch Brustdrüse Epithel ATCC
T84 Mensch kolorectales Karcinom / Lungenmetastase Epithel ATCC
HUVEC human umbilical vein endothelial cells Mensch Nabelschnurvene Endothel ICLC
HMEC human mammary epithelial cell Mensch Epithel
Peer Mensch T cell leukemia DSMZ
MDCK II Madin Darby canine kidney Hund Niere Epithel ATCC
CMT canine mammary tumor Hund Brustdrüse Epithel
MyEnd myocardial endothelial Maus Endothel
COS-7 Cercopithecus aethiops, origin-defective SV-40 Affe - Cercopithecus aethiops (Grüne Meerkatze) Niere Fibroblast ATCC
HL-60 human leukemia Mensch Promyeloblasten Blutzellen DSMZ
A-549 Mensch Lungenkarzinom Epithel DSMZ
Jurkat Mensch T-Zell-Leukämie Blutzellen DSMZ
RTL-W1 rainbow-trout liver - waterloo1 Regenbogenforelle (Oncorhynchus mykiss) Fibroblast (wahrscheinlich)

Siehe auch

Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen - bietet verschiedene Tests an, um die Identität und Sauberkeit von Zellkulturen zu überprüfen.

Literatur

  • Schmitz, Sabine: Der Experimentator: Zellkultur. Spektrum Akademischer Verlag; 1. Auflage 2007. ISBN 3827415640
  • Lindl, Toni: Zell- und Gewebekultur. Spektrum Akademischer Verlag; 5. Auflage 2002. ISBN 3827411947

Referenzen

  1. Landmarks
 
Dieser Artikel basiert auf dem Artikel Zellkultur aus der freien Enzyklopädie Wikipedia und steht unter der GNU-Lizenz für freie Dokumentation. In der Wikipedia ist eine Liste der Autoren verfügbar.
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